❓ 常见问题
项目设计常见问题
1. 如何保证设计方案的转基因果蝇一定能够符合课题的需求？
设计方案会在实验前同客户确定，客户没有异议，则项目开始。
由于生物科学的不确定性，我公司只承诺获得设计方案的DNA序列，不承诺后续实验的效果。
我公司会根据已有的经验对客户的需求提供实验建议，但不承诺建议一定有效。
2. 果蝇常用的二元调控系统有哪些？
gal4-UAS-gal80；
lexA-lexAop；
QF-QUAS-QS；
split-gal4（p65AD，gal4DBD）。
3. 想用CRISPR在果蝇某基因上做敲入，一般选择N端还是C端？
C端可以采用加marker的方法，比较方便转基因阳性筛选，我公司比较推荐。
N端为了防止marker移除残留片段破坏5UTR功能，一般不能加marker。
具体还要以实验需求，基因特性，和转录本情况综合考量。
收费与周期常见问题
1. 如果项目失败，还会收费吗？
分几种不同的情况：
(1) 全部由我公司负责的CRISPR项目：
实验失败，未拿到阳性，会重新换方案继续做直到成功或者客户认定为失败而停止。如果失败，退还70%费用，只收取30%。
(2) 全部由我公司负责的attP-phiC31项目：
如果失败，退还70%费用，只收取30%。
(3) 我公司负责部分步骤的项目：
如果我公司不清楚某些项目设计信息或者样品信息，由于无法评估项目成功可能性，如果项目失败，我公司不负责任，收取全部应收费用。
2. 收费有无优惠，如何优惠？
我们对项目推荐采用预付款的收费方式：
(1) 项目总金额低于1万，无折扣。
(2) 预付款高于1万，所覆盖的项目有5%折扣。
(3) 预付款高于2万，所覆盖的项目有10%折扣。
对于新客户，有5%折扣（新客户第一个项目立项日期一个月内所有的项目和预付款都享有此优惠）。
所以，新客户如果能预付2w以上的项目款，则这笔项目款购买的服务共计有15%的折扣。
样品制备常见问题
1. 直接注射的质粒样品制备和邮寄需要的注意事项？
如果是直接注射的质粒样品，需要提供20ul，500ng/ul以上。
要用去内毒素试剂盒提取（推荐qiagen系列试剂盒）。
尽量保证体系纯净，由于我公司针型较细，如果样品质量略差，容易造成堵针现象。
邮寄过程尽量保持低温，用有缓冲作用的包装防止EP管被挤压破裂。
果蝇注射常见问题
1. 注射果蝇遗传背景分别是什么？
我们的默认背景是y+,w1118。如果有其他背景要求，请特殊提出。
2. 我可以使用自己的果蝇品系进行注射吗？
可以，请提供具体果蝇信息。如果无法获得阳性，同样会收取全款。
果蝇杂交筛选常见问题
1. 常用的筛选marker有哪些？
第一类：
眼睛表达(3×p3 promoter)的RFP,GFP,dsred,YFP等。（注：3×p3 promoter会在神经系统的部分细胞表达，可能影响某些神经相关的标记实验）
第二类：
红眼：mini-white（浅红眼），white（深红眼），vermilion（砖红眼）
第三类：
yellow（黄体），ebony（黑体）
2. 如果特殊项目，特殊染色体或者特殊品系，没有balancer，没有marker，如何杂交和筛选阳性？
注射P0代杂交相应野生型果蝇，后代F1代先单只杂交野生型传代后，鉴定得到R/+(R为转基因，+为野生型基因)。
后代F2单只♂和单只♀做杂交传代后，鉴定得到：R/+ × R/+
后代F3单只♂和单只♀做杂交传代后，鉴定得到：R/R × R/R
如果转基因纯合致死，则无法得到R/R，无法获得稳定遗传的转基因品系。
可以考虑条件敲除的方式或者纯合品系。
交付和品系保存常见问题
1. 如何保证我拿到的果蝇能够长期保存，如果意外死亡了，怎么办？
1.做多管备份
2.低温保存(18~20C)，减小倒管次数
3.实时监控温箱温度和饲养情况
4.交付后3个月内，我公司提供免费托管服务
5.超过3个月如需托管，我公司提供付费托管服务，具体请咨询相关人员。
2. X染色体项目稳定品系的保存有什么注意事项，会提供纯合品系吗？
X染色体balancer：Fm7a或Fm6b等稳定性较差，长期保存可能会发生交换导致balancer表型缺失或者基因突变回复，建议保存成纯合品系。如果无法纯合，需定期检查果蝇情况，如有问题需要重新构建稳定系。
因此，由于X染色体特殊性，我公司会默认做成纯合品系，无法纯合时，也会提醒客户时常留意果蝇情况，以防出现问题。
3. 国内的果蝇如何邮寄？如果天气太热或者太冷，如何保证果蝇邮寄途中不会死亡？
1.保温策略：
超过28C，果蝇会很快死亡，如果长时间低于4C，果蝇也难以生存，所以邮寄保温比较重要。
可以用泡沫盒保温邮寄。
我公司采用双层泡沫盒（大盒套小盒），小泡沫盒里层放果蝇，大小泡沫盒之间放冰袋保冷或者加热包保温。外面大泡沫盒打包严实即可。
2.果蝇时期：
一般三龄幼虫和蛹比较"皮实"，比较适于邮寄。
4. Marker移除的项目，会提供marker未移除前的稳定品系吗？
会的，我公司默认提供marker移除前和移除后的稳定系，但marker未移除的品系表型有更大的可能性达不到预期。
5. 如果没有balancer工具果蝇，提供可稳定遗传的品系如何做到？
需做成纯合品系才能稳定遗传，如果无法纯合，则无法稳定遗传。
6. 2号染色体项目稳定品系的保存有什么注意事项，会提供纯合品系吗？
2号染色体最常用balancer是CyO，表型是卷翅。但由于卷翅基因在低温（小于23C）表型为接近平翅，难于分辨。所以，尽量将果蝇保存在25C以上的恒温。
我公司也曾发现25C卷翅变平的情况，所以，2号染色体的转基因做成纯合最保险。
我公司默认不会提供2号染色体的纯合，有此需求请特殊提出。
7. 3号染色体项目稳定品系的保存有什么注意事项，会提供纯合品系吗？
3号染色体balancer一般有两种：TM6B和TM2
两种balancer相比，TM6B表型比较好观察，但稳定性比TM2略差。TM2表型较难分辨，需要一定的经验才能准确区分。
我公司默认不会提供3号染色体转基因纯合品系，默认保存成TM6B的品系，如有纯合或者TM2的构建需求，请特殊提出。
